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TEMED放一段時間會有沉澱結晶還能用嗎?

关于TEMED 储存问题,这个产品需要放在阴凉干燥处保存,长期需要惰性气体中,否则容易氧化产生沉淀,但是产生沉淀并不影响使用。更多>>

在TAE缓冲液中加入RNA酶抑制剂,会不会影响缓冲效果?

TAE buffer 加入 RNA 酶抑制劑,並不會影響緩沖效果,但是影響 RNase inhibitor 本身的效果更多>>

熒光定量PCR為什麼選用白色96孔盤比較好?

一般實驗室都是用透明,建議客戶選白色96孔盤是因為熒光定量PCR的光射反應主要在于貼在96孔板表面上的高透膜好壞會有影響,96孔盤作成白色,可避免光線折射造成数據失真更多>>

SDS PAGE膠一段時間還不凝膠是為什麼?

製作SDS PAGE膠,鑄膠前其中會需要加入APS催化劑,如果長時間不凝膠,可能原因分析APS濃度太低或已經失效,另外還要考慮到溫度條件,若室溫太低也會延緩凝膠的時間更多>>

蛋白電泳的條帶扭曲是為什麼?

一般分析原因是因為鑄膠不良或有氣泡陷入,同時也可能是樣品成分的影響更多>>

DNA樣品上樣到膠孔後會流失到緩衝液中為什麼?

水平電泳槽在製備 DNA or RNA agarose gel, 其實左右邊應該有墊高放「齒梳」的位置,因此齒梳不會太靠近底部,但若是 solution 太熱就放入齒梳,容易碰觸底部,泳道穿孔而造成樣品漏液流失更多>>

孵育時抗體濃度太高會造成條帶反白?

孵育過程使用的抗體如果濃度太高,在凝膠成像前加ECL, 其中有一個受質 H2O2 會被 HRP 的 peroxidase 作用,就是所謂「燒 band」同理是反應太強,因此產生反白現象,增加抗體稀釋倍率即可更多>>

WB實驗壓出了目的蛋白卻沒有內參蛋白為什麼?

最終目的蛋白壓出條帶內參條帶沒有,那就是 anti-Rubisco or anti-actin 抗體使用量的問題或是抗體本身造成的問題更多>>

DNA樣品上樣到Agarose膠孔裡為什麼會出現拉絲擴散?

溶解的琼脂糖温度很高的情况下,讓溫度降下來一點點再倒进了模具中,而且没有完全凝固好不能拔掉梳子,溶解好的琼脂糖一定要凉凉,如果急用,可以用自来水辅助降温用手感觉能握住,不烫手,再倒入模具更多>>

分子量为500左右的蛋白,应该用多少的分离胶?其它步骤需不需要特殊处理?

超高分子量的蛋白質分離, 請使用 8 % SDS-PAGE, 然後跑胶的時間要延長。 等待 pre-stained protein marker 70kD 跑到將近底層,小於 70kD的都跑到電泳緩衝液里更多>>

目的蛋白125KDa,使用300mA轉印一小時壓不出條帶,後來轉印三小時,用麗春紅染膜仍然無蛋白?

1. 300 mA 轉膜, 3 小時,絕對不會「所有的」蛋白都「過轉」了。相反的,客戶在 SDS-PAGE 跑膠,上樣品有沒有加入 prestained protein marker, 可以依據這個來判斷有沒有轉膜 或者是過轉! 2. 與其說是「過轉」膜,也有可能是完全沒有將蛋白質..更多>>

蛋白在電泳過程中為什麼蛋白沒辦法濃縮,染色後蛋白條帶也壓不平?

主要原因可能是電泳緩衝液的PH值不正確所造成更多>>

同一片膠上同樣大小的目的蛋白為什麼電泳結束沒有在一條直線上面?

loading buffer 內有一個成份 glycerol 甘油, 用於增加樣品的密度 所以 loading buffer , 加多一點,就會造成下沉更多>>

100bp以下的小分子核酸片段用Agarose跑膠效果不好?

20bp以上100bp以下的小分子核酸片段應該用聚丙烯酰胺凝胶19:1來跑膠才能很好的分離開來條帶更多>>

DNA Marker為什麼出現微笑條帶?

1 电泳缓冲液陈旧。 电泳缓冲液多次使用后,离子浓度降低,ph值上升,缓冲能力减弱,从而影响电泳的效果,建议经常更换电泳缓冲液。2 电泳条件不合适。电泳时电压不超过20v/cm,温度应低于30℃。此外,凝胶质量差和凝固不均与都会出现不规则的条带..更多>>

蛋白電泳跑細胞樣本沒問題,跑小鼠組織樣本曝光後會有一個個小點點?

建議 loading sample, 請客戶務必要先離心 10000 rpm 然後 5 分鐘, 下樣品才不會有沈澱, 所以可以请客户跑胶后 考马斯染胶看看。如果染胶条带正常那就要从后段找原因更多>>

目的蛋白電泳條帶壓不平是為什麼?

同比一片膠上的蛋白marker如果條帶能壓的扁直,那應該是目的蛋白的上樣量太多造成更多>>

凝膠成像曝光圖片出現一片白的曝光不出来是怎么回事呢?

如果白色區域的背景很乾淨,研判是一級抗體根本沒有孵育,因此盛裝抗体的盒子不能偏斜,要保證轉印膜能完全浸泡在孵育液中更多>>

免封閉的Super antibody mate產品能不能適用於Dotblot實驗呢?

mdbio公司免封閉的Super antibody mate專利產品可以適用於Dotblot實驗更多>>

蛋白條帶在電泳過程中越跑越窄是為什麼?

蛋白條帶越跑越窄並非電泳試劑或設備問題,蛋白樣品應該要經過脫鹽處理,可採用過脫鹽柱或透析袋方式更多>>

蛋白上样缓冲液变性完成固体狀,是什么原因造成?舉例具体使用方法是5X上样缓冲液加入蛋白样品中变性8分钟,比例是5X加入样品中成1X

一般是雜蛋白質的濃度太高 , 或者是上樣緩衝液體積計算錯誤 , 以案例說明:粗蛋白抽取液體積 80 uL (微升) ,僅需要加入 上樣緩衝液 20 uL (微升),然後加熱 100 C 煮沸 3-5 mins ,即可放置 ice 上,然後離心 10,000 rpm, 3 mins, 取上清液..更多>>

蛋白電泳過程為什麼出現條帶脫尾的情況

往往因為蛋白樣品制備未經過脫鹽處理或者Buffer中的鹽類太多造成,另外也可能因為蛋白loading buffer其中甘油比例不對所導致蛋白樣品的沉降效果不好更多>>

提取試劑盒中離心柱經過高速離心後的篩膜會破裂?

一般試劑盒會隨附產品說明書,過程中利用離心柱離乾目的物都會標明離心的g值與時間,並非rpm,因此如果轉速過高就有可能造成膜的破裂,g值的計算取決於離心機的轉子轉速和旋轉半徑更多>>

為什麼凝膠成像的圖片能看到蛋白Marker的少許條帶?

若是抗體為多株抗體,則會辨認非專一性的蛋白質條帶,包括protein marker上的條帶,這是抗體的專一性不夠,不影響實驗的數據判讀更多>>

為什麼凝膠成像後的目的條帶出現中空泛白?

目的條帶出現中空泛白往往是因為製作轉印前的膠膜三明治有氣泡所導致更多>>

WB實驗中凝膠成像曝光時間一般是多久

凝膠成像曝光時間一般只要1-2秒,曝光時間過長會造成ECL被快速氧化,形成條帶反白或目的蛋白周邊出現白色條帶更多>>

如何使用免封閉的Super antibody mate

不同蛋白表達濃度不一樣,不同廠家抗體稀釋倍數不一樣,因此,第一次使用將先按照原廠抗體公司建議的稀釋倍數進行依抗二抗分別孵育各90分鐘,凝膠成像後如發現抗體和抗原的結合訊躁比太高,即可放大稀釋一抗及二抗倍數,待抓到合適抗體條件後,一抗二抗即..更多>>

Western Blotting 问题诊断及对策

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实验室常用试剂、缓冲液的配制方法

1 M Tris-HCl (pH7.4,7.6,8.0) 组份浓度 1 M Tris-HCl 配制量 1L 配制方法 1.称量121.1 g Tris置于l L烧杯中。 2.加入约800 ml的去离子水,充分搅拌溶解。 3.按下表加入浓HCl量调节所需要..更多>>

蛋白质电泳相关试剂、缓冲液的配制方法

30%(W/V)Acrylamide(聚丙烯酰胺) 组分浓度 30%(W/V)Acrylamide 配制量 1 L 配制方法 (1)称量下列试剂,置于l L烧杯中。Acrylamide 290 g;BIS 10 g (2)向烧杯中加入约600 ml的去离子水,充分搅拌溶解。 (3)加去离子水将溶..更多>>

核酸电泳相关试剂、缓冲液的配制方法

50× TAE Buffer (pH8.5) 组份浓度 2M Tris-醋酸,100mM EDTA 配制量 1L 配制方法 1. 称量下列试剂,置于 1 L 烧杯中。 Tris 242 g;Na2EDTA· 2H2O 37.2 g 2.向烧杯中加入约 800 ml 的去离子水,充分搅拌溶解。 3. 加入 57.1 ml 的乙..更多>>

核酸、蛋白质杂交用相关试剂、缓冲液的配制方法

20× SSC 组份浓度 3.0 M NaCl,0.3 M Na3citrate· 2H2O(柠檬酸钠) 配制量 1L 配制方法 1.称量下列试剂,置于 l L 烧杯中。 NaCl 175.3 g; Na3citrate· 2H2O 88.2 g 2. 向烧杯中加入约 800 ml 的去离子水,充分搅拌溶解。 3.滴加..更多>>

实验室常用培养基的配置方法

Ampicillin(氨卡青霉素)(100 mg/ml) 组份浓度 100 mg/ml Ampicillin 配制量 50 ml 配制方法 1. 称量 5 g Ampicillin 置于 50 ml 离心管中。 2.加入 40 ml 灭菌水,充分混合溶解后,定容至 50 ml。 3. 用 0.22 µm 过滤膜过滤除菌..更多>>

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